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RT-qPCR反應主要步驟
日期：2025-06-04 04:14
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摘要：
RT-qPCR原理的三個主要步驟：
1 反轉錄：
?使用逆轉錄酶和特定引物將RNA樣品反轉錄成cDNA。
?該步驟將RNA模板轉化為更穩定且可擴增的DNA形式。
?反轉錄過程中使用特定引物。
2 PCR擴增：
?使用特定引物對cDNA進行PCR擴增，這些引物環繞目標區域。
?PCR是一個循環過程，呈指數級擴增DNA模板的數量。
?PCR反應中包含熒光染料或探針，它們結合到擴增的DNA序列上并發出熒光信號。
3 熒光實時檢測：
?使用實時PCR儀器實時監測熒光信號。
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RT-qPCR原理的三個主要步驟：
1 反轉錄：
?使用逆轉錄酶和特定引物將RNA樣品反轉錄成cDNA。
?該步驟將RNA模板轉化為更穩定且可擴增的DNA形式。
?反轉錄過程中使用特定引物。
2 PCR擴增：
?使用特定引物對cDNA進行PCR擴增，這些引物環繞目標區域。
?PCR是一個循環過程，呈指數級擴增DNA模板的數量。
?PCR反應中包含熒光染料或探針，它們結合到擴增的DNA序列上并發出熒光信號。
3 熒光實時檢測：
?使用實時PCR儀器實時監測熒光信號。
?熒光的數量與每個PCR循環中擴增的DNA數量成比例。
?使用專業軟件分析數據以確定循環閾值（Ct）值，該值表示熒光信號達到特定閾值水平所需的循環數。Ct值用于計算原始樣品中存在的目標DNA量，從而允許進行基因表達或病毒載量等定量分析。